Métodos alternativos al uso de animales: Nuevo enfoque integrado para la evaluación de productos químicos.

You can find it here the English version of this article.



La implementación de métodos alternativos es una tendencia emergente a escala global, como parte de un esfuerzo en la reducción del sufrimiento animal y en la generación de datos redundantes. Desde el 2014, el Consejo de Experimentación Animal (Concea) brasileño ha reconocido los métodos alternativos validados por la OCDE. En 2015, la agencia reguladora ANVISA (Autoridad Nacional de Vigilancia Sanitaria) aprobó este método y determinó que los laboratorios instalados en Brasil tendrán como plazo hasta septiembre de 2019 para sustituir los métodos in vivo utilizados actualmente por métodos alternativos. En este contexto, y siguiendo el principio de los 3 Rs (Refinar, Reducir y Sustituir), NSF International Brasil está trabajando en implementar enfoques que combinen la revisión de datos disponibles en literatura y análisis in silico, in chemico e in vitro para la evaluación toxicológica de formulaciones agroquímicas y farmacéuticas.

 

 

La OECD recomienda que, antes del inicio de cualquier nueva prueba toxicológica, en especial pruebas in vivo, los datos disponibles en la literatura deben considerarse, para evitar datos redundantes y sufrimientos animales innecesarios. Por lo tanto, una prueba de evaluación de enfoque integrado (IATA) puede llevarse a cabo⁽¹⁾. Una IATA se inicia con la búsqueda de datos existentes (Parte 1), acompañada de un análisis de peso y evidencia (WoE) (Parte 2). Para este análisis de WoE, toda la información disponible debe ser recogida y evaluada a partir de la base de datos relevante. La predicción por relación cuantitativa entre estructura y actividad (QSAR) es un recurso efectivo para esta evaluación. Se puede utilizar una WoE adecuada para una conclusión regulatoria para la clasificación toxicológica de una sustancia en estudio. Si la WoE no es suficiente, se deben realizar nuevos análisis (Parte 3), como se describe en la Figura 1.

 

NSF International Brasil presenta una perspectiva de ofertar este tipo de enfoque, empezando por las Partes 1 y 2, en un intento de obtener una conclusión regulatoria sin la necesidad de pruebas. En esta fase, el estudio de QSAR es realizado por NSF International para dar soporte a este enfoque. Si no es posible llegar a una conclusión, se propone una nueva fase del estudio, con la realización de pruebas. Es importante mencionar que en la Parte 3 de la IATA, nuevas pruebas deben realizarse con métodos alternativos, y el uso de animales debe considerarse sólo en último caso. De acuerdo con la resolución brasileña, los métodos alternativos deben sustituir los métodos in vivo en uso para pruebas de irritación/corrosión ocular, irritación/corrosión dérmica, sensibilización dérmica y estudios de micronúcleos. 

 

 

En el caso de la necesidad de nuevas pruebas para la evaluación de seguridad de la sustancia de prueba, se pueden seguir las siguientes normativas:

 

 

Esta prueba utiliza un cultivo en monocapa de células de córnea de conejo (SIRC) en una microplaca de 96 posiciones. Las células se tratan con dos concentraciones de la sustancia de prueba (5% y 0,05%). Después de un breve tiempo de exposición (5 minutos) con la sustancia de prueba y el solvente de control de uno ensayo de MTT se realiza para medir la viabilidad de la célula. En los casos en que la viabilidad celular se sitúa en valores ≤ 70% en las dos concentraciones, la sustancia puede clasificarse como categoría 1 (potencial de ser corrosivo). La sustancia se clasifica como sin categoría (sin necesidad de clasificación) cuando las dos concentraciones presentan un resultado de viabilidad celular >70 %⁽²⁾.

 

Esta prueba utiliza un epitelio reconstruido similar a la córnea humana. Después de la exposición del epitelio a la sustancia de prueba y al solvente control, la viabilidad del tejido puede ser evaluada a partir de um ensayo de MTT. Si la viabilidad está en un valor >60%, la sustancia de prueba se clasifica como sin categoría (sin necesidad de clasificación)⁽³⁾.

 

 

Utiliza un modelo tridimensional de piel humana donde se aplica la sustancia de prueba. Después del tratamiento por un breve período en contacto con la sustancia de prueba y los controles, el ensayo MTT se realiza, permitiendo la identificación de productos con potencial corrosivo⁽⁴⁾.

 

Corrosión Dérmica

 

Utiliza el mismo modelo tridimensional de piel humana descrito en la OECD 431, pero con un procedimiento diferente. La principal diferencia entre las dos pruebas es el tiempo de exposición con la sustancia de prueba⁽⁵⁾.

 

 

Dermatitis alérgica son manifestaciones clínicas de una respuesta adaptativa de un sistema inmunológico tras la exposición a una sustancia sensibilizante. Los eventos clave químicos y biológicos en la sensibilización dérmica están bien establecidos y conocidos como Via de Efecto Adverso (AOP). El evento molecular inicial es el enlace covalente de la sustancia sensibilizadora con proteínas de la piel (haptenación) que puede ser detectada por el ensayo in chimico de reactividad directa de péptidos, descrito en la OECD 442C (DPRA), El segundo evento es la activación de queratinocitos de la epidermis y puede ser detectado por el método KeratinoSens (ARE-Nrf2 Luciferasa), descrito en la OECD 442D. El tercer evento clave es la activación (maduración) y la movilización de células de Langerhans y dendríticas, que pueden ser evaluados por los métodos descritos en OECD 442E (h-CLAT, U-SENS y IL-8 LUC). Los eventos 2 y 3 ocurren a nivel celular. El cuarto evento ocurre en el órgano, y se evalua por la presencia de antígenos células T, mediada por células dendríticas, evaluados por LLNA (Local Lymph Node Assay), OECD 429. La activación de estos eventos resultan en inflamación, que es la respuesta del organismo (Figura 2).

 

 

El documento de la OCDE 256⁽⁶⁾ proporciona algunos ejemplos de enfoques definidos para ser utilizados de acuerdo con el contexto de la IATA para la sensibilización dérmica. Un enfoque definido consiste en un procedimiento de interpretación de datos generados de fuentes de información conocidas, se basan en reglas y pueden ser utilizadas individualmente o con otras fuentes de información. Estos enfoques han sido desarrollados por corporaciones y pueden identificar el riesgo potencial. Un ejemplo es la secuencia estratégica desarrollada por Kao Corporation (Figura 3) que evalúa los eventos clave 1 y 3 descritos anteriormente. El enfoque se inicia con el evento 3. En el caso de un resultado positivo, se puede concluir que la sustancia de prueba causa sensibilización. Si el resultado es negativo, el evento clave 1 se debe evaluar. Un resultado positivo es suficiente para clasificar la sustancia como sensibilizante. Dos resultados negativos indican un no sensibilizante.

 

 

En Brasil, NSF Brasil es la instalación de prueba de BPL de NSF International. Con una amplia experiencia en la generación de datos BPL, NSF atiende a sus clientes con experiencia en estudios fisicoquímicos, residuos, ecotoxicológicos, genotóxicos, toxicológicos (in vivo y in vitro), patogenicidad, análisis 5-Batch e estúdios in silico. Por seguir normativas brasileñas e internacionales tales como NBR, OECD y EPA, los patrocinadores tienen el beneficio de someter los informes de alta calidad para registros a escala global incluyendo USA, Europa, países de Asia y América Latina. Acreditaciones incluidas: BPL por la agencia brasileña INMETRO, ISO 17025, REBLAS, de las agencias brasileñas MAPA y ANVISA, entre otras.

 

Acerca de NSF International
 

Con sede en Michigan, EE.UU., NSF International es la organización global líder comprometida en proteger y mejorar la salud humana. Fundada en 1944, actúa en 150 países y cuenta con más de 2.500 colaboradores, incluyendo micro biólogos, toxicólogos, químicos, ingenieros y profesionales de salud pública y ambiental para realizar nuestra misión.

Cualquier consulta, contáctenos en comercial.agro@nsf.org

 

6. OECD Test No. 256 - on the Reporting of Defined Approaches and Individual Information Sources to be Used within Integrated Approaches to Testing and Assessment (IATA) for Skin Sensitization. 2016.

Esta historia se publicó inicialmente en la revista AgroPages '2019 Latin America Focus'. Descargue la versión PDF de la revista para leer más historias.