Análisis GLP de 5 lotes – Un proceso progresivo para registros en Brasila

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Desde la aparición de los pesticidas sintéticos durante la II Guerra Mundial, éstos se han usado extensivamente para la protección de cultivos, preservación de comida y control de enfermedades. Los pesticidas pueden clasificarse como herbicidas, insecticidas o fungicidas, que se usan en agricultura para mejorar el crecimiento y protección de las plantas. Su comercialización, ya sean nuevos o genéricos, requiere de un registro en el país en el que serán comercializados.
 

Para el registro de un producto técnico, se deben realizar varios tests obligatorios, como el análisis de 5 Lotes (para cada ingrediente activo), la obtención de información y caracterización de impurezas superiores o iguales al 0,1% y otras de importancia toxicológica, los tests de propiedades fisicoquímicas, los estudios de ecotoxicología, y los estudios de toxicología aguda y crónica. Todos estos estudios se recogen en un dosier que se presenta seguidamente a las autoridades regulatorias. Dicho dosier también debe incluir una descripción detallada del proceso de fabricación, aparición de impurezas fruto de reacciones secundarias en dicho proceso (orgánicas, inorgánicas y solventes residuales), materiales básicos de partida e impurezas derivadas de la degradación de productos.
 

El análisis 5 Lotes sirve para calificar el producto manufacturado en base a las especificaciones de referencia según las guías regulatorias, y permite garantizar la calidad y seguridad del producto. En el caso de Brasil, se deben seleccionar 5 lotes secuenciales del proceso final de fabricación y al igual que en otras regiones y países, detallar la información del proceso de fabricación, materiales básicos, intermediarios, reacciones paralelas, subproductos, solventes, sales inorgánicas, catalizadores, etc. También es necesario predecir las rutas de formación de impurezas tanto orgánicas como inorgánicas más probables y a hacer un análisis de las muestras para determinar su presencia junto con una cromatografía 3D generada con un detector de HPLC-PDA. como evidencia de la separación de todos los componentes. Finalmente, se debe incluir una validación detallada del método analítico seguido de un análisis de los 5 Lotes.
 

A nivel esquemático, se puede definer el análisis completo en 3 fases:

a) Fase preliminar en la cual se considera la información cualitativa de todos los componentes presentes en el producto, una cromatografía en 2 D para mostrar que todos los componentes e impurezas relacionadas han sido separadas y que se realiza usando un HPLC o un GC con columnas de polaridades variadas y a distintas longitudes de ondas, y un cromatograma de 3D.

b) Método de comprobación, según SANCO 3030799 Rev 5 u OPPTS 830.1800.

c) Test de 5 Lotes, según SANCO3030/90 Rev 5 u OPPTS 830.1700

Para el proceso de separación de todas las impurezas e ingredientes activos se usa una cromatografía que puede ser de gases (GC) acoplada con sistema de detección FID/MS/NPD/ECD o líquida (LC) acoplada con un sistema PDA/UV/MS/ELSD y/o ICP-OES/MS. Dicha cromatografía se hace con combinaciones de columnas y fases móviles de polaridades variable. Para asegurar que no habrá impurezas retenidas o coeluidas, la fase orgánica móvil y la fase acuosa son programadas para correr de 100 % acuosa a 100 % orgánica. Las impurezas volátiles o solventes residuales son determinados por cromatografía de gases. Las sales inorgánicas e impurezas elementales son determinadas por Cromatografía de intercambio iónico e ICP-OES/MS, respectivamente.
 

Cualquier impureza desconocida o degradación de producto ≥ 0,1 % tiene que ser investigada. También deben detallarse las impurezas que se haya comprobado que pueden ser altamente toxicas. Dicha caracterización puede incluir distintas actuaciones como el enriquecimiento, el aislamiento, la separación, la síntesis y/o aclaración de estructura de las impurezas, usando una serie de técnicas de separación como el FT-IR-Raman, el LC-LC-MS, el HRMS, el GC/MS, el NMR, el LC-NMR, el NMR Multidimensional u otras. 
 

Todos estos tests y determinaciones son comunes en los distintos organismos regulatorios, incluyendo:

● Europa: Regulación (EC) 1107/2009, Regulación de la Comisión (EU) N° 283/2013 y Anexo (Sección 5) de Regulación (EU) N° 284/2013, SANCO 3030/99 rev.5 22 de marzo de 2019.

● US-EPA: OPPTS 830.1550, OPPTS 830.1700, OPPTS 830.1800

● Brasil: ABNT NBR 14029:2005, NBR 14029-2016.

● Mundialmente: especificaciones de la FAO o la IUPAC sobre impurezas relevantes.

En el caso de Brasil se requiere de una cromatografía 3D de las impurezas, separada por LC-UV-PDA, que se entrega junto con el resto de datos. Este sistema resalta la información de impurezas adicionales si las hubiere, y es una característica obtenida mediante un HPLC acoplado a un detector de haz de fotodiodos. Un cromatograma convencional 2D coloca el tiempo en el eje X y la señal del detector en el eje Y. La tercera dimensión de la longitud de onda se incluye para para confirmar la posible presencia de cualquier impureza coeluida o cualquier otra impureza inesperada, contaminante, producto de degradación, etc., que puedan tener una absorción máxima a una longitud de onda diferente a la longitud de onda esperada. Por último, se incluyen varias visiones del cromatograma en 3D para evitar cualquier posibilidad de excluir algún pico relacionado con una impureza. La figura en 3D ayuda a identificar cualquier impureza que muestre una absorción de UV a una longitud de onda diferente a la seleccionada en el cromatograma en 2D. Este espectro combinado permite ver que los picos son puros y que no existe ningún pico escondido detrás de una impureza o del pico principal. 

Con esta aproximación se ayuda a las empresas y autoridades regulatorias a tener una idea clara, mediante un análisis sencillo de las posibles impurezas adicionales que puedan estar escondida en el cromatograma y a identificar si el el pico de un compuesto es “puro” o no. Este concepto de la pureza del pico es muy relevante, en términos de identificar la presencia o ausencia de picos de otro componente(s) ayudando a la empresa propietaria del producto a entender y modificar el proceso(s) para asegurar que se encuentra bajo control, y también al ente regulatorio a tener compuestos seguros y eficaces de una calidad y potencia deseada. 
 

En la actualidad, JRF GLOBAL dispone de un equipo con experiencia en la realización de los ensayos de análisis de 5 Lotes y contamos con un exitoso legado de presentación de procesos regulatorios de más de 25 años. También ofrecemos orientación regulatoria a nuestros clientes para el registro de sus productos en plazos competitivos. Nuestra experiencia se refleja en la calidad de nuestros informes y expedientes los cuales son aceptados por autoridades regulatorias de todo el mundo. El equipo de JRF está formado por más de 50 directores de estudios y más de 110 personas de nivel técnico expertos en química con distintos grados académicos a nivel de master y doctorado. JRF GLOBAL dispone de un laboratorio GLP equipado con equipos analíticos de última generación, incluyendo LC-UV/PDS, L-MS/MS, ICP-OES/MS, GC-FID/NPD/FDP/MS y otros para el análisis de 5 Lotes y otros estudios necesarios para la preparación de un dosier.

Esta historia se publicó inicialmente en la revista AgroPages '2019 Latin America Focus'. Descargue la versión PDF de la revista para leer más historias.